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            A375/DDP细胞株的处理方法要严格安装三步骤

            点击次数:177 发布时间:2018-09-26
              A375/DDP细胞株的处理方法要严格安装三步骤
              1、首先镜检:观察A375/DDP细胞株形态是否正常,对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很好,观察细胞密度,有疑议及时咨提供细胞的技术人员。由于运输的时间或者温度的变化,很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样,主要是贴壁牢固问题,平时贴壁就不是很牢,在装满的培养基瓶子里面,会发生的脱落,细胞聚集在一起,但是细胞生长还是正常的,通过离心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的贴壁生长。
              2、当通过上一步的观察,A375/DDP细胞株初步没有任何问题时,进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时,则处理如下:弃除瓶中大部分培养基,仅保留5到10mL培养所需的常规培养基;或更换新鲜的培养基,置于培养箱中,随后每天观察。细胞株在低于正常生长温度情况下,会调整为静止期,或者慢速生长期,必须恢复37度的至少3个小时左右,才能重新调整到接近对数生长期的状态,在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率,和细胞的存活率。
              3、如果经第一步观察发现细A375/DDP细胞株密度超过90%,并且细胞状态很好时,则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快,状态稳定,不易受影响的细胞可以一次多传几瓶;对于生长较慢,细胞比较薄,状态容易波动的细胞类型,一次少传些,每瓶细胞密度大些,便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞株,第一次处理也可以依照第二种情况。
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