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            K562/ADR细胞株细胞培养所需的实验设备和用品

            点击次数:612 发布时间:2017-12-25
            一、K562/ADR细胞株培养的条件
            细胞培养是一项程序复杂,要求严谨的实验技术,要使细胞在体外长期存活,必须模拟体内环境,供给细胞必要的条件。如:细胞的营养需要(水、无机盐、氨基酸、1、维生素B2、维生素B6及10种无机成分标准物质" href="/HTML_Products/42/products_107642.html">维生素、葡萄糖、生长因子等),细胞的生存环境(37℃,O2,5% CO2,pH值7.2——7.4,渗透压等),无污染(保持无菌环境,细胞培养用品需高压灭菌处理,培养液要除菌处理,实验过程要严
            格按照无菌操作进行)。
            二、K562/ADR细胞株细胞培养所需的实验设备和用品
            1.超净工作台 工作原理是利用鼓风机驱动空气通过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒,使空气得到净化。净化的空气徐徐通过工作台面,使工作台内构成无菌环境。
            2.压力蒸汽消毒器 主要作用是湿热消毒,常用于玻璃器皿、解剖器械、移液器枪头、离心管的消毒,用途广泛。
            3.紫外灯 进行紫外线消毒,主要用于培养室空气、操作台、移液器和加样枪等的表面消毒。
            4.CO2培养箱 设定的条件为37℃,CO2,浓度为5%。使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题:用螺旋口瓶培养细胞时,需将瓶盖微松,以保证通气。目前已经有一些细胞培养瓶采用通气瓶盖,无需旋松瓶盖。保持培养箱内空气干净,定期消毒。箱内添加足量的无菌蒸馏水以保持箱内湿度,避免培养液蒸发。
            5.倒置显微镜 用于每天观察细胞生长和增殖状况,并可以通过显微摄像记录细胞的生长状态。
            6.液氮罐 用于细胞冷冻储存。液氮温度在-196℃,注意使用时不要溅到皮肤,以免冻伤。
            7.其他耗材 培养瓶,培养板,吸管,电动吸引器,电动移液枪,冻存管等。
            三、K562/ADR细胞株细胞培养常用试剂
            1.消化液 主要成分胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽键,除去细胞间黏蛋白及糖蛋白,影响细胞骨架,从而使细胞分离。胰蛋白酶是一种黄白色粉末,用无Ca2+、Mg2+的PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25%。用滤器过滤除菌。一般胰蛋白酶液消化时间为2——10分钟。胰蛋白酶液浓度越高,作用越强,但若超过一定限度会造成细胞损伤。用含血清的培养液能够终止其对细胞的消化作用。
            2.培养基 是维持体外细胞生存和生长的溶液。目前的细胞培养主要采用基础培养基加营养物质的模式。基础培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐等,已标准化生产,组分和含量确定,如TC199、MEM、RPMI-1640、DMEM等。营养添加物质主要是血清,血清中成分主要包括多种蛋白质(白蛋白、球蛋白、铁蛋白等)、多种金属离子、激素、促贴附物质如纤黏蛋白、冷球蛋白、胶原、各种生长因子等。血清的营养成分丰富,培养效果好,但是成分复杂,影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析,而且易发生支原体污染。
            一般说来,含5%小牛血清的培养基可使大多数细胞维持不死,但支持细胞生长一般需加10%血清。对于血清支持细胞生长的生物学效应已得到证明,但对血清中的复杂成分至今尚未完全清楚。血清质量好坏是实验成败的关键。常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、马血清等,其中以胎牛血清质量zui好。优质血清的标准是透明、淡黄色、无沉淀物、无细菌、支原体和病毒污染。血清的灭活(消除补体活性)条件是56℃,30分钟。过滤除菌可进行血清的消毒。
            血清中不仅存在促细胞生长的因子,同时也存在抑制细胞生长的因子或毒性因子,因此在含血清培养基中培养的细胞所反映的生物学特性是细胞和复杂血清因子的综合反应。在生长因子、蛋白质工程、基因表达调控等研究领域,迫切需要用无血清培养基培养细胞。无血清培养基的主要研制策略是在基础培养基中补充各种必需因子,如激素、生长因子、结合蛋白等。无血清细胞培养基的使用保证了实验结果的准确性、可重复性和稳定性,减少了细胞污染,简化了提纯和鉴定各种细胞产物的程序。无血清培养液中能促进细胞系生长的添加物都是独特的,适用于某种细胞株的培养液,很可能不适台另一种细胞株的生长。即使同源组织的不同细胞株,所需添加物也不同。目前的多能干细胞培养,已经普遍采用血清替代物。
            培养基的选择原则:培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,可能在DMEM或M199中同样容易生长。总之,首选MEM做黏附细胞培养,RPMI-1640做悬浮细胞培养。 
            上海奥陆生物科技有限公司(www.yqwj.tw)主营:胎牛血清透析,GIBCO胎牛血清,Hyclone胎牛血清,T-24/DDP细胞株,HCT-8/VCR细胞株
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