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            Hela/TAXOL细胞株宿主细胞与重组蛋白生产讲解

            点击次数:542 发布时间:2018-01-24
            Hela/TAXOL细胞株宿主细胞与重组蛋白生产讲解
            动物细胞是生产治疗性重组蛋白的强有力工具。为与小分子药物区别开来,治疗性蛋白、疫苗以及细胞治疗产品统称为生物制品。宿主细胞的选择和改造对于提高产品的产量和质量来说至关重要。因此必须对细胞进行筛选,选出具有高表达量和良好生长特性的细胞。在此我们主要讨论适用于大规模生产重组蛋白的细胞株的筛选。
            工业上重组蛋白的制备主要有两种方式:瞬时转染和稳定转染。瞬时转染经常用于制备少量蛋白(多达克级)用于药物开发早期的蛋白活性或动物实验。瞬时转染并不产生克隆细胞株,它只是暂时将编码外源蛋白的质粒转导入已有的细胞株里面(比如HEK293或COS细胞)。随着细胞的分裂外源基因不断丢失,蛋白产量较低,一般在1-100mg/L。近年来有报道称Hela/TAXOL细胞株中瞬时表达产量可达1g/L。
            与瞬时转染不同,稳定细胞株是为工业化生产治疗性蛋白而构建的。稳定细胞株需要具备在不同的时间,不同的场地以及不同的批次间生产相同质量产品的能力。在选定生产用细胞株之后,需要建立主细胞库(mater cell bank)。从主细胞库复苏后,扩增建立工作细胞库(working cell bank),工作细胞库用于生产。细胞库通常保存在液氮中,需要维持整个产品的生命周期。在构建生产用细胞株的过程中,宿主细胞和表达载体至关重要。
            稳定Hela/TAXOL细胞株构建---高产细胞株的秘密
            CHO和骨髓瘤细胞是构建稳定细胞株zui常用的两种宿主细胞。基本上用这两类细胞生产的治疗性蛋白都能分泌到细胞外,从而可以从细胞培养液中收获产物。CHO细胞属于成纤维细胞,是一种非分泌型细胞,它本身很少分泌内源蛋白。 
            上海奥陆生物科技有限公司(www.yqwj.tw)主营:胎牛血清透析,GIBCO胎牛血清,Hyclone胎牛血清,T-24/DDP细胞株,HCT-8/VCR细胞株
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